جداسازی و شناسایی باکتری های مولد پروتئاز از پساب کارخانه شیر کرمان

پروتئازها از جمله مهم¬ترین آنزیم¬های صنعتی هستند که حدود 65% از بازار جهانی آنزیم های صنعتی و حدود 25% از تولید کل آنزیم ها را به خود اختصاص داده¬اند. پروتئازها در صنایع مختلف از جمله افزودنی شوینده ها، تیمار فاضلاب، بازیافت نقره و در صنایع غذایی، چرم¬سازی، بازیافت نقره از فیلم های عکس برداری با اشعه ایکس و داروسازی کاربرد دارند. در این تحقیق باکتری مولد آنزیم پروتئاز از پساب کارخانه شیر پگاه کرمان جداسازی شد. ایجاد هاله در اطراف کلنی¬های رشد کرده در محیط حاوی کازئین آگار (2%) نشانگر فعالیت پروتئولیتیک می¬باشد. بالاترین فعالیت پروتئازی متعلق به سویه byk27 بوده و از لحاظ بیوشیمیایی و مولکولی (توالی-یابی ژن 16sr rna) شناسایی شد کهchryseobacterium indologenes می¬باشد. پروتئاز تولیدی توسط این سویه در سه مرحله رسوب گذاری با آمونیوم سولفات، دیالیز در بافر 10mm tris-hcl و کروماتوگرافی تعویض یونی q-سفاروز به طور نسبی خالص شد. میزان فعالیت پروتئازی با استفاده از روش زایموگرافی مورد تایید قرار گرفت. محیط کشت باکتریchryseobacterium indologenes byk27 برای تولید انزیم پروتئاز با روش تاگوچی بهینه¬سازی شد. محیط بهینه حاوی گلوکز (1%)، عصاره مخمر (0/06%)، nacl (0/01%)، mgso4 (0/01%)، k2hpo4 (0/2%) و منبع نیتروژن معدنی nh4cl ((0/5% w/v در دمای 40˚c و ph 9 به دست آمد. میزان تولید آنزیم پروتئاز در محیط بهینه 63% و میزان رشد باکتری در محیط بهینه 25% افزایش یافت. این آنزیم دارای بیشترین فعالیت در دمای 40°c و ph 8 و بیشترین پایداری در دمای 40°c و ph 8-9 بود. یون k+، حلال آلی 2-مرکاپتواتانول، سورفاکتانت triton x100 و شوینده تجاری تاژ باعث افزایش فعالیت و پایداری فعالیت پروتئازی شدند. آنزیم پروتئاز تولید شده در غلظت شوری 1% بیشترین فعالیت و 90% از پایداری خود را حفظ کرده است. هدف از این پژوهش استفاده صنعتی از آنزیم پروتئاز است و این نتایج خاطرنشان می¬سازد که این آنزیم قابلیت استفاده در بیوتکنولوژی از جمله در صنایع شوینده و سنتز ترکیبات با ارزش را دارا است.